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IMPRÍMELOS Y REALIZA LAS PRÁCTICAS
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PROTOCOLO DE LA PRÁCTICA
CULTIVO Y TINCIÓN DE LEVADURAS
MATERIA DE TRABAJO
· Cámara de cultivo
· Vaso de precipitados
· Mechero de alcohol
· Guantes de látex
· Portas y cubres
· Microscopio óptico
· Pipetas
· Levadura del pan (G. Sacharomyces).
· Alcohol de quemar
REACTIVOS
· Agua
· Glucosa
· Colorante: azul de metileno
PROCEDIMIENTO
· En un vaso de precipitados de 50 cc, pon unos 30 cc de agua; añade con una cuchara una pequeña cantidad de glucosa, remuévelo hasta obtener una disolución; ahora coge una pequeña muestra de levadura de panadería e introdúcela en la disolución.
· Enchufa la cámara de cultivo y mete en ella el vaso de precipitados. Espera 24 horas; pasado este tiempo, saca el vaso de precipitados de la cámara, y observa si ha tenido lugar algún cambio en “la mezcla” que tú habías puesto. Anota dichas variaciones.
· Ahora, prepara el mechero de alcohol, enciéndelo y ten cuidado, podría caerse. A continuación, con una pipeta, coge del vaso una pequeña muestra del cultivo de levaduras, ponlo sobre un porta, y procede a fijar las células (levaduras).
· Para fijarla pasa el porta, de forma rápida, sobre la llama del mechero, sujetando éste con la otra mano. La cara que entra en contacto directo con el calor, es la opuesta a la que contiene la muestra. Tras dos o tres pasadas rápidas, retira el porta, y observa si el líquido que contiene va desapareciendo. Vuelve a repetir el proceso hasta que se haya evaporado totalmente; es el momento en el que las células han quedado fijadas sobre el porta. Has de tener cuidado en todo el tiempo que lleve la fijación, porque podrías quemar a las levaduras. “Ten cuidado con el mechero, al pasar el porta sobre la llama, podrías golpearlo y tirar el alcohol sobre la mesa, la llama se extendería sobre toda la superficie que estuviera en contacto con el alcohol.” Apaga la llama de mechero tras terminar la fijación.
· Ahora procede a teñirlas. Vamos a utilizar un colorante conocido como azul de metileno, es un colorante que se utiliza para teñir células vivas. Vierte unas cuantas gotas de este colorante sobre la muestra, y déjalo sobre ella, unos dos minutos. Retira el colorante en exceso, sobre un vaso de precipitados, procurando no mancharte, ni manchar tu zona de trabajo. A continuación coge agua en un vaso de precipitados, y con una pipeta obtén una pequeña cantidad de ella; viértela con cuidado sobre la muestra, lentamente, dejándola escurrir; para ello inclina suavemente el porta. Si lo haces de otra forma, podrías hacer que el agua arrastrara a las células y desaparecieran del porta. Seca con un papel absorbente los restos de agua.
· Ahora coloca un cubre sobre la preparación, apoyándolo por uno de sus lados sobre el porta, y dejándolo caer lentamente sobre él cubriendo la muestra.
· Ya está preparado para su observación al MO.
OBSERVACIÓN AL MO
· Enchufa el microscopio y enciéndelo. Coloca la preparación sobre la platina del microscopio. Ahora gira el revolver y coloca en la posición de observación, el objetivo de menos aumentos (x4). Con el macrómetro baja la platina, hasta la posición más baja.
· Es el momento de mirar por el ocular, y a la vez girar despacio el macrómetro. La platina subirá lentamente, en el momento que observes las células teñidos de azul, habrás logrado enfocarlas. En la platina hay un tornillo que te permitirá mover la preparación, dentro del campo de observación del microscopio. Así podrás escoger la parte de ésta en la que haya más células.
· Ahora gira el revolver y coloca el objetivo de x10, Estarás viendo a las levaduras 100 veces más grandes de lo que en realidad son. Afina el enfoque del microscopio con el micrómetro. Dibuja lo que observas.
INFORME SOBRE LA PRÁCTICA
CULTIVO Y TINCIÓN DE LEVADURAS
INVESTIGA
1. ¿Qué tipo de microorganismo son las levaduras?
2. Busca información sobre las fermentaciones alcohólicas. Escribe la ecuación química que representa a este proceso. ¿Con qué finalidad realizan las levaduras la fermentación láctica?
3. ¿Es la fermentación un proceso de catabolismo celular? ¿Por qué las levaduras no realizan respiración celular?
4. ¿Qué interés industrial tienen? Enumera algunos productos que se utilicen habitualmente, que hayan sido obtenidos por levaduras
5. Escribe la ecuación química que representa a las fermentaciones alcohólicas.
6. ¿Hay otros tipos de fermentaciones?
7. Busca otras técnicas de fijación en microscopia, así como los colorantes que se suelen utilizar.
8. ¿Qué tipo de reproducción es el que se ha producido en las levaduras, para que se haya producido un crecimiento tan acentuado de la población de levaduras?
VALORACIÓN
1. Dibuja lo que has observado.
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